Luciferase實驗
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- 產(chǎn)品描述
描述
一：技術簡介
Luciferase報告基因系統(tǒng)是以熒光素(luciferin)為底物來檢測螢火蟲熒光素酶(fireflyluciferase)活性的一種報告系統(tǒng)。熒光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的過程中，會發(fā)出生物熒光(bioluminescence)。然后可以通過熒光測定儀也稱化學發(fā)光儀(luminometer)或液閃測定儀測定luciferin氧化過程中釋放的生物熒光。熒光素和熒光素酶這一生物發(fā)光體系，可以極其靈敏、高效地檢測基因的表達。是檢測轉錄因子與目的基因啟動子區(qū)DNA相互作用的一種檢測方法。
二：應用原理
轉錄因子是一種具有特殊結構、行使調(diào)控基因表達功能的蛋白質(zhì)分子，也稱為反式作用因子。某些轉錄因子僅與其靶啟動子中的特異順序結合，這些特異性的序列被稱為順式因子，轉錄因子的DNA結合域和順式因子實現(xiàn)共價結合，從而對基因的表達起抑制或增強的作用。熒光素酶報告基因實驗（luciferaseAssay）是檢測這類轉錄因子和其靶啟動子中的特異順序結合的重要手段。
其原理簡述如下：
（1）構建一個將靶啟動子的特定片段插入到熒光素酶表達序列前方的報告基因質(zhì)粒，如psiCHECK等。
（2） 將要檢測的轉錄因子表達質(zhì)粒與報告基因質(zhì)粒共轉染293細胞或其它相關的細胞系。如果此轉錄因子能夠激活靶啟動子，則熒光素酶基因就會表達，熒光素酶的表達量與轉錄因子的作用強度成正比。
（3） 加入特定的熒光素酶底物，熒光素酶與底物反應，產(chǎn)生熒光素，通過檢測熒光的強度可以測定熒光素酶的活性，從而判斷轉錄因子是否能與此靶啟動子片段有作用。
